腺病毒表达系统中的难点主要在于怎么将外源基因表达框或者外源的shRNA表达框构建选蛋周至腺病毒骨架载体上。由于腺病毒骨架载体比较大(~30kb)，而且载体中的一些常用酶切位点几乎都有多个，如果用常规来自的酶切-连接的方式将360百科外源基因或者shRNA表达框构建至腺病毒骨架载体上，成功率很低，因此，目前的腺病毒表雷讲乙即挥局尽宪倍达系统基本上都是用同源重组的方法将外源基因或shRNA表达框构任互良础蛋建至腺病毒骨架载体上史存证经居律父领。
腺病毒(Adenovirus)是目前最高效可靠的重组病毒表达系统之一，可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白。其具备以下优点:
充 1. 宿主范围广。腺病毒可感染一系列哺乳动物细来自胞，除可感染几乎所有人的细胞类型外，还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。
360百科 2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期，故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。
3. 腺病毒具有嗜上皮细胞特性，因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞，这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。
4. 病毒滴度高，可用于动物水平的实验。
5. 有较好的生叶族治主掌年经物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中;实验中虽然会有一定机率出现RCA(即复制型腺病毒)，但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体，所以一般危害不绿维把那大。
重组腺病毒的包装制备:重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位(pfu)中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连当标研海画石升益牛续侵染后被挑选和扩增排形成的。重组腺病毒可通过超速离心纯化，并测定滴度及进行PCR鉴胞降察告沿击定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为10pfu/ml，获得的量为2-4 双温你益考等冲斗承带ml。
重组腺病毒的特性:一般的，单个腺病毒通常是在30×15两鲁损游化0mm细胞培养皿中制备远意向烧权毛施作的。
获得量:1×10病毒颗粒/细胞
滴定浓度:1×10~1×10个病毒基因组/m限争烈事被证光则命商术l
最终体积:1 ml纯化后的病毒液(储存于PBS)
储存:批量储存的最佳条件为-80°C
几种病毒载体的区别:
腺病毒表达系统 | 慢病毒表达系得题弱便办抗合买交统 | 逆转录病毒 | |
病毒基因组成 | 双链DNA | 单链RNA | 单链推上抗氢基雨副RNA |
载导容量 | < 8 kb | < 8 kb | < 6kb |
基因整合功能 | 无。轴身合部严病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因 | 巴计镇用范建贵背推坚围有。病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因 | 有。 |
沿封林八落药失接乎 表达丰度 | 高水平表达 | 中 | 中 |
表达时间 | 快(1-2天) | 海重低发据慢(2-4天) | 快念复又独形若而与接(1-2天) |
感染细胞类型 | 分裂和不分裂细胞 | 分裂和不分裂细胞。适用于难转染细胞 | 感联染分裂细胞，但在干细胞中表达效率低 |
滴度TU/ml | 10^12 | 10^9 | 10^9 |
四环素诱导系统 | 不可以 | TET-ON , TET-OFF | 不可以 |
毒性作用 | 细胞毒性 | 遗传毒性 | 遗传毒性 |
免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 |
动物模型 | 不能得到转基因动物 | 可产生转基因动物，效率达50以上 | 可以，但很难 |
安全系数 | 高 | 高 | 中 |
能否用于MIRCORNA | 可以 | 可以 | 不可以 |
RNAi | 病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应，不适合做RNAi实验 | 适合，是RNAi实验的优选工具 | 可以用作RNAi实验 |
基因过表达 | 包装容量较大。可以满足较大基因的包装，是过表达基因的优选工具 | 包装容量有限，过表达的基因过大时，病毒滴度受到影响 | 包装容量有限，过表达的基因过大时，病毒滴度受到影响 |
常见应用 | 1、体外细胞基因转导2、基因治疗 | 1、体外细胞基因转导2、基因治疗 | 体外细胞基因转导，突变筛选，功能基因库构建 |
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